Коклюш. Методы диагностики

Коклюш – острое  инфекционное заболевание преимущественно детского возраста, основным симптомом которого являются приступы спазматического кашля.

Возбудителем коклюша является Bordetella pertussis. Род Bordetella, кроме возбудителей коклюша, включает еще два вида бактерий, патогенных для человека: B. Parapertussis – возбудитель паракоклюша и B. Bronchiseptica - возбудитель бронхисептикоза, заболевание которое развивается чаще у домашних животных (у человека регистрируется только в 0,5 % случаев). По морфологическим и тинкториальным свойствам бордетеллы – грамотрицательные палочки размером 0,5-1,0 х 0,2-0,3 мкм, неподвижные, спор не образуют, имеют небольшую капсулу. В препарате они располагаются поодиночке или попарно.

Бордетеллы коклюша строгие аэробы, требовательны к питательным средам. Для своего размножения они нуждаются в аминокислотах, как факторах роста, а также в добавлении крови, древесного угля для нейтрализации образовавшихся жирных кислот, которые тормозят развитие бордетелл.                             

Оптимальная температура роста 35 – 37оС в условиях повышенной влажности, на питательных средах появляются через 48-72  ч. Они мелкие (диаметром около 1мм), выпуклые, влажные, блестящие, на КУА имеют серовато – кремовый  цвет, а на среде Борде – Жангу приобретают жемчужный или ртутный блеск. Ферментативная активность у бордетелл коклюша выражена слабо: они не расщепляют углеводы и белки, не восстанавливают нитраты, образуют                     каталазу и оксидазу.

Основным методом диагностики коклюша является бактериологический. Метод информативен в ранние сроки заболевания (период спазматического кашля), выделение культуры зависит от сроков взятия материала; на 1-й неделе заболевания положительные результаты удается получить у 95% больных, на 4-й – лишь у 50 %, а  начиная с 5-й недели микроб выделить уже не удается. Серологические методы можно использовать для ретроспективной диагностики, а также у больных с отрицательными результатами бактериологических исследований.

Исследуемым материалом служит слизь с задней стенки глотки до начала антибактериальной терапии и не ранее чем через 3-4 ч после еды или натощак. Забор материала можно производить двумя методами: методом «кашлевых пластинок» и с помощью носоглоточного тампона. При использовании первого метода в момент появления кашля открытую чашку Петри с питательной средой подносят ко рту на расстоянии 10 см и держат в течение 6-8 кашлевых толчков.

Исследуемый материал засевают на одну из специальных сред: КУА, Борде – Жангу, молочно – кровяной  агар. Для угнетения роста посторонних микроорганизмов поверхность питательной среды обрабатывают пенициллином. В каждую чашку наносят по 0,1 мл антибиотика, содержащего 7,5 МЕ и растирают стеклянным шпателем по всей поверхности питательной среды. Чашки помещают в термостат при 37оС на 72 ч. Через 72 ч выросшие колонии просматривают с помощью бинокулярного стереоскопического микроскопа или бинокулярной лупы. Из подозрительных колоний готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. При наличии в мазках грамотрицательных палочек ставят реакцию агглютинации на стекле с агглютинирующей коклюшной сывороткой и делают пересев в пробирку или чашку Петри для получения чистой культуры бордетелл коклюша. Выросшую культуру идентифицируют и дифференцируют от других видов рода по комплексу свойств.

Для определения уреазы в агглютининационные пробирки вносят 0,3 мл густой суспензии исследуемого материала и 2–3 капли 0,1%-ного спиртового раствора фенолфталеина. В положительном случае через 20-30 мин  появляется малиновое окрашивание, указывающее на расщепление мочевины уреазой.

При отсутствии роста 72 ч чашки ставят в термостат еще на 48 ч и затем их изучают повторно. Предварительный ответ выдается через 3-5 суток, окончательный через 5-7 суток.                                               

Другим методом выявления возбудителя является иммунофлюоресцентный (РИФ), который используется как дополнительный при наличии качественных реактивов (моноклональных антител к ЛПС возбудителя).

Современным и перспективным методом диагностики является полимеразная цепная реакция (ПЦР), чувствительность метода составляет несколько бактерий в образце, а специфичность приближается к 100%. Кроме того, разработана «сэндвич» - техника иммуноферментного анализа (ИФА) с применением очищенных аффинных антител к КТ.

Серодиагностику проводят в реакции агглютинации (РА), непрямой гемагглютинации (РНГА) и связывания комплемента (РСК). Антитела в крови больных появляются на 3 – 4 неделе заболевания. Диагностическое значение имеет нарастание титра антител в динамике болезни в 4 раза и более, поэтому реакции ставят повторно через 10 – 14 дней. При обследовании не привитых против коклюша диагностическое значение имеет наличие антител в титрах 1:80. Реакции ставятся параллельно с коклюшными и паракоклюшными антигенами. Латекс-микроагглютинация, являясь модификацией РА, позволяет выявлять антитела в более ранние сроки, но этот метод может давать ложноположительные результаты.

 

 

Фельдшер-лаборант

санитарно-бактериологического отделения

микробиологической лаборатории

Доронина Л.Г.

Дата: 23.08.2018